細胞免疫熒光染色（培養板中染色）
1．固定：培養的細胞，棄去培養基，冷的PBS洗兩次，首先用4%多聚甲醛（4孔板200μl）固定10min，PBS洗2次，每次5－10分鐘。
2．在含0.1% Triton X-100（4孔板200μl）的PBS中進行10min的透膜處理，PBS洗2次，每次5-10分鐘。手動輕輕晃動數次，吸盡液體。
3．羊血清用PBS配製成4％羊血清封閉液，室溫封閉（4孔板200μl）30分鐘。
4．吸盡液體，勿洗，添加一抗，於37℃條件下孵育1h或放在4℃冰箱過夜，PBS洗3次，每次5-10分鐘。
5．去除一抗後，細胞用PBS洗三次。
6．滴加熒光素標記的二抗，避光，37℃，60 min，0.01M PBS沖洗，5min×3次；
7．防淬滅封片劑封片，4℃，避光保存。
8．熒光顯微鏡觀察拍照。
《細胞培養》司徒鎮強版（爬片）：
用品：
（1）0.01mol/L、pH 7.2的PBS：稱取NaCl 8g，Na2HpO4 1.15g，KH2PO4 0.2g，加蒸餾水至1000ml溶解後，調至pH7.2.
（2）0.5mol/L、PH9.5的磷酸鹽緩衝液（CB）：稱取NAHCO3 3.7g，NACO3 0.6g加蒸餾水至100ml，溶解後調pH至9.5；
（3）50%純：1份純甘油一份CB；
（4）伊文藍溶液：稱取伊文藍1g，加入100ml PBS中，溶解後加1mL 1% NaN3，過濾，4℃保存。臨用前取0.1mL，加9.9mL PBS稀釋成0.01%濃度使用。
（5）一抗、二抗
（6）蓋片染色缸、溼盒、溫箱、震盪儀、熒光顯微鏡。
1 細胞的準備與固定：爬片，待細胞接近長成單層，取出蓋玻片，浸入PBS（0.01mol/L，PH7.4）洗兩次，然後根據實驗目的，選擇適當固定劑固定細胞（95% 乙醇，10-30min或丙酮5-10min）；
2 將已固定的細胞蓋玻片放入染色缸中，用PBS振洗5min，取出吹乾。
3 滴加適當稀釋的特異性抗體，置溼盒內，37℃保溫30-60min或4℃冰箱中過夜。
4 FPS振洗3次，每次5min，吹乾。
5 滴加適當西式的熒光素標記抗體（用0.01%伊文藍溶液稀釋）在溼盒中，37℃保溫30-60min；
6 用PBS振洗2次，每次5min，然後用蒸餾水振洗一次；
7用50%甘油封片；
文獻中：Immunofluorescence
1 用含有4%多聚甲醛的PBS將細胞固定30min（Cell cultures were fixed with PBS containing paraformaldehyde (4%) for 30 min.），PBS洗滌幾次後，細胞在0.1% Triton X-100(不含nectin（粘連蛋白）染色)和1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS中滲透1小時。PBS沖洗片刻後，將細胞置於室溫下孵育2小時，在相同的阻斷液中稀釋一抗。PBS沖洗後，用Alexa 488或 Alexa 594 孵育45min。細胞經PBS沖洗後，它們立即用封片劑封片，並在與Zeiss Axiovert 200熒光顯微鏡或激光掃描共聚焦顯微鏡(LSM510 Meta)下進行檢測。熒光強度在MetaMorph v6.2r6軟件中進行量化。
2 4孔培養板，PBS沖洗，4%甲醛固定10min，隨後，用PBS甘氨酸(100mm)洗滌凝膠，室溫下在1% IgG山羊抗小鼠免疫熒光(IF)緩衝液中封閉培養基中孵育1.5 h。用一抗孵育，在IF緩衝液或PBS中稀釋，4℃過夜。所用抗體爲小鼠抗NeuN 1:50稀釋，鼠抗Sv2 1:500稀釋，鼠抗Tau 克隆T461:100稀釋。緩衝液沖洗後，用二級Alexa Fluor-488和-594結合的山羊抗小鼠抗體和山羊抗兔抗體孵育凝膠，按1:400稀釋，室溫下孵育1h, ImageJ software (NIH)軟件定量熒光強度。
