今天是參加簡書的“日更挑戰”第一天，時間匆忙暫且寫一篇簡單的小文章介紹ddPCR吧，我是通過“腫瘤低頻突變檢測”瞭解到這項技術的，後面竟然發現它的應用還挺廣泛。不過這篇文章暫且從“低頻突變檢測”這個角度描述ddPCR的應用，以後有其他應用方向的瞭解再來更新這篇文章～
ddPCR應用方向： 拷貝數變異研究、複雜來源樣品中含量極低核酸分子的檢測、NGS數據驗證、NGS測序文庫的鑑定、miRNA等差異微小的基因表達研究。
1. ddPCR的背景介紹
ddPCR（dropletdigital PCR）：在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級別的微滴（其中，每個微滴含有的待檢測靶分子爲0個、1個或多個）。經過PCR擴增之後，逐個對每個微滴進行檢測，有熒光信號的微滴判讀爲1，沒有熒光信號的微滴判讀爲0，根據泊松分佈原理及陽性微滴的個數與比例，即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。
目前有兩種主流的實現形式：
- 油包水的ddPCR
- 芯片微孔的ddPCR
這麼長的一堆文字介紹，理解起來還是着實費力吧？對於這種技術原理的理解，還是動畫形式更方便，我就是個老好人，動畫鏈接精心挑選如下：https://www.bilibili.com/video/BV1Bt4y1X79e?p=1&share_medium=iphone&share_plat=ios&share_source=COPY&share_tag=s_i×tamp=1610781003&unique_k=8JyMfj
ddPCR與qPCR相比較：
之前一篇文章裏提到過qPCR（參考鏈接：https://www.jianshu.com/p/1beacb4df8e7），也是一個核酸定量分析的方法，我在其中花了很多文字介紹qPCR的擴增曲線，因爲qPCR的定量分析就是通過設置濃度梯度的“標準品”核酸溶液，根據不同濃度梯度的“qPCR擴增曲線”獲得一系列Ct值，做出Ct值與核酸濃度的標準曲線。然後將“待測樣品”的Ct值帶入標準曲線，以此推斷“待測樣品”的核酸濃度。
且不考慮實驗操作存在的誤差，通過標準品繪製標準曲線的過程就不可避免得引入很多不確定因素。因此，qPCR核酸定量分析是一個相對定量的方法。而ddPCR不需要製作標準曲線便可以對待測樣本直接定量。