一、純化的病毒粒子轉化法侵染
兩篇文章均是差速離心法分離得到的病毒粒子+真菌原生質體（【現學現賣】實驗-PEG介導原生質體轉化；【現學現賣】實驗-製備真菌原生質體）→PEG介導的原生質體轉化法，最終使病毒侵染了真菌。
二、構建全長cDNA，體外轉錄侵染
上面這兩篇文章是個“連續劇”中的一部分，文中真菌病毒DaRV是一個正義單鏈RNA病毒。文章1測了病毒全基因組序列並且構建全長cDNA克隆，文章2體外轉錄，製備真菌原生質體後進行電轉。第二篇文章關於製備原生質體和電轉實驗的條件寫得很詳細。我整理的大致流程如下：
類似思路的還有這篇文章，故事很完整，推薦：
三、從純化濃縮的病毒粒子中提取dsRNA，用於體外轉錄，侵染
文章分離得到病毒粒子，提取dsRNA，再使用 TNT Coupled Reticulocyte Lysate System (Promega)體外轉錄通過加熱變性的dsRNA。之後導入真菌原生質體。
四、全基因組合成技術
總結前面介紹的幾種方法存在的弊端：對於（一）中的方法，有的病毒粒子經過差速離心侵染活性降低；（二）是一個比較成熟的體系，基本都能做出來，只是比較麻煩；（三）一株真菌中病毒種類一般多於一種，如果兩個病毒通過差速離心和蔗糖密度梯度離心不能分開，那麼這個就不好用。
上週看《環球科學》總結了10項有望改變世界的技術。其中的全基因組合成技術可以讓研究人員使用軟件設計基因序列，合成後再導入微生物，實現特定功能，比如讓細菌合成新型藥物。文章討論的都是醫藥領域，我當時想的只是不用構建這麼多overlapping的載體可太好了。
全基因組合成技術普及的未來，我們研究寄主和病原物之間的互作肯定更加便捷。